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宮頸癌是最常見的婦科腫瘤，其中99%的病例是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的。從HPV感染到發(fā)生宮頸癌，短則數(shù)年，長則數(shù)十年，若在這一時期內(nèi)及時發(fā)現(xiàn)HPV感染并識別癌前病變，就能有效防治宮頸癌。

目前，很多體檢套餐里都包含了宮頸癌篩查項目。早年常用巴氏涂片檢查，為提高準確性，現(xiàn)在通常采用液基細胞學檢測(LBC)和HPV病毒檢測技術(shù)。雖然這些方法能夠在癌癥發(fā)生前發(fā)現(xiàn)和治療癌前病變，但篩查的重點要么是檢測HPV，要么是用細胞學鑒定異常宮頸細胞，而檢測病毒DNA或RNA的分子診斷測試在識別癌癥或癌前病變方面的能力很差。用巴氏試驗分析宮頸細胞，即使結(jié)合高危HPV的分子檢測，也會導(dǎo)致大量不必要的陰道鏡檢查--這是一種侵入性檢查，幫醫(yī)生通過肉眼檢查宮頸病變。

為此，法國Pasteur研究所病原體探索實驗室的研究團隊開發(fā)了一種新型的體外分子診斷程序--HPV RNA-Seq，用于檢測高危HPV感染，以及識別宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)患者。

HPV RNA-Seq是基于多重逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)和下一代測序(NGS)的雙重組合。RT-PCR是一種檢測少量RNA的敏感方法，RNA是一種反映HPV基因活性的遺傳物質(zhì)，而NGS使精確地描述擴增病毒序列的多樣性成為可能。這使得檢測樣本中多達16個高危或假定高危的HPV以及癌前標志物的存在成為可能。

HPV RNA-Seq是一項獨特的測試，結(jié)合了分子檢測 (HPV類型)和宮頸細胞學(細胞表現(xiàn)型)的優(yōu)點。這種“二合一”的診斷方法，不僅能檢測HPV感染的類型，還能顯示癌前標志物。這種檢測可以提高診斷高危HPV感染的能力，以較低的成本快速獲得結(jié)果，并有助于避免不必要的診斷程序。

圖示：電子顯微鏡下的乳頭瘤病毒粒子。(來源：Institut Pasteur/Odile Croissant)

在這項概念驗證研究中，HPV RNA-Seq被用于分析55例患者的樣本，28例低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)和27例癌前病變，即高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)。

結(jié)果顯示：

HPV RNA-Seq能夠在一組16人的高危HPV患者中檢測并確定HPV感染類型，其結(jié)果可與官方批準并廣泛使用的HPV DNA分子診斷試劑盒相媲美。事實上，HPV RNA-Seq檢測出的HPV陽性患者比DNA檢測多出兩例，同時也發(fā)現(xiàn)了更多的合并HPV感染的患者。

該檢測的敏感性(檢測HPV存在的能力)為97.3%，陰性預(yù)測值(NPV，不存在HPV的可能性)為93.8%。Eloit教授指出：“有效的子宮頸癌篩查需要對高危HPV感染具有較高的敏感性和NPV，因為HPV檢測呈陰性的女性通常在幾年后才會再次接受檢測。”

細胞學是一種快速分類HPV患者的方法，而組織學被認為是宮頸癌診斷的金標準。然而，組織學分析更具侵入性，需要更多的時間來得出結(jié)果。為了確定新的檢測方法能否在宮頸癌診斷中占一席之地，研究人員還將細胞學與HPV RNA-Seq進行了比較，并發(fā)現(xiàn)了高級別細胞學標志物，HPV-RNA-Seq作為一種分診檢測具有令人鼓舞的診斷性能。

研究人員還發(fā)現(xiàn)，通過與組織學對比，HPV RNA-Seq的陽性預(yù)測值(PPV, HPV感染的可能性)總是大于細胞學的PPV。Eloit教授評論說：“與細胞學相比，這一觀察結(jié)果為HPV RNA-Seq潛在的附加醫(yī)學價值提供了有力的論據(jù)。”

Eloit教授認為，在某些患者中使用HPV RNA-Seq可以幫助消除不必要的陰道鏡檢查。他還預(yù)測，未來有一天，技術(shù)將允許同時運行多個樣本，每次測試的成本可能會降至10至20美元。該測試也可能適用于其他HPV相關(guān)的癌癥，如肛門癌和頭頸部癌。

該研究的主要作者，病原體探索實驗室的Philippe Pérot博士指出：“我們的方法遵循了目前發(fā)展NGS擴增子面板用于分子診斷的趨勢，同時也仍然適用于傳統(tǒng)的分子分析格式。這種靈活性可以使HPV RNA-Seq成為許多實驗室的一種方便、可靠和負擔得起的解決方案。

參考來源：愛思唯爾(Elsevier)